347 ステンレス鋼の化学組成 SARS-CoV-2 に特有の静脈血または毛細血管の血液、T 細胞反応の大きさによって、新型コロナウイルス感染症 (COVID-19) に対する免疫力が決まります。

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347 ステンレス鋼の化学組成

ステンレス鋼 347 コイルチューブの化学組成

ステンレス鋼 347 コイル チューブの化学組成と機械的特性は次のとおりです。
- カーボン - 最大 0.030%
- クロム – 17-19%
- ニッケル – 8-10.5%
- マンガン – 最大 1%

ステンレス鋼 347 コイルチューブの機械的特性

ステンレス鋼 347 コイル チューブのメーカーによると、347 コイル チューブの機械的特性は次のとおりです。
- 引張強さ (psi) – 75,000 分
- 降伏強度 (psi) – 30,000 分
- 伸び (% in 2") – 25% 分
- ブリネル硬度 (BHN) – 最大 170

ステンレス鋼 347 コイルチューブの用途と用途

• 製糖工場で使用されるステンレス鋼 347 コイルチューブ。
• 肥料に使用されるステンレス347コイルチューブ。
• 産業で使用されるステンレス鋼 347 コイルチューブ。
• 発電所で使用されるステンレス鋼 347 コイルチューブ。
• 食品および乳製品に使用されるステンレス鋼 347 コイルチューブ。
• 石油およびガスプラントで使用されるステンレス鋼 347 コイルチューブ。
• 造船業界で使用されるステンレス鋼 347 コイルチューブのメーカー。

SARS-CoV-2 特異的 T 細胞は、COVID-19 の感染と進行を防ぐと考えられていますが、これについての直接的な証拠はありません。ここでは、リアンの採血から6か月以内のSARS-CoV-2特異的インターフェロンγ陽性T細胞の全血測定値と、陽性のCOVID-19診断検査結果（PCRおよび/または側方流動）を比較した。静脈血サンプルを提供した参加者 148 名のうち、SARS-CoV-2 特異的 T 細胞反応の大きさは、感染者よりも保護されたままの参加者の方が有意に高かった（P < 0.0001）。感染リスクは % でしたが、高強度ではこのリスクが 5.4% に減少しました。これらの結果は、集団スケールの T 細胞免疫データへのアクセスを容易にする拡張可能な毛細管血液アッセイをテストした追加の 299 人の参加者に一般化されました (14.9% 対 4.4%)。したがって、SARS-CoV-2 に特異的な T 細胞の測定は感染リスクを予測できるため、個人および集団の免疫状態をモニタリングする際に評価する必要があります。
SARS-CoV-2 感染に対する免疫反応を測定し理解することは、将来の新型コロナウイルス感染症の流行による公衆衛生と経済への影響を最小限に抑えるための効果的な将来戦略を開発するために重要です。免疫相関関係の特定は、ウイルス感染に対する集団の感受性に関する重要な情報を提供し、入院のピークを早期に警告できる可能性があるほか、人々が自分の感染リスクと他人に感染するリスクを個人的に管理できるようになります。免疫監視は、健康で高リスクの患者1、2、3、特にSARS-CoV-24変異株における新型コロナウイルス感染症ワクチンの有効性を評価するために重要であることが証明されており、免疫不全の検出は免疫力を高める必要があることを意味する ワクチン接種を受けて予防する将来の発生。
SARS-CoV-2 感染に対する個人の免疫レベルは、曝露時のウイルス量、ウイルス変異体、年齢、以前のワクチン接種/感染状況、併存疾患、薬剤、そして最も重要な抗 SARS-CoV 感染などの複数の要因によって決まります。 。2 適応免疫反応はウイルスへの曝露時に発生します5。SARS-CoV-2 感染および/またはワクチン接種に対する免疫応答の評価は、構造タンパク質 (スパイク糖タンパク質など) に特異的な抗体の存在を測定する血清学的アッセイに焦点を当ててきました。ただし、抗体の有無だけでは防御免疫反応を正確に判断できません。反応は時間の経過とともに大幅に弱まり6、回復期または二重ワクチン接種を受けた人では SARS-CoV-2 変異体が中和されるためです。突破口感染者数7．実際、Omicron 変異体 (B.1.1.529) によって引き起こされる症候性 COVID-19 に対する防御力は、mRNA ワクチン接種後わずか 4 ～ 6 か月後に約 10% に低下しましたが、重篤な疾患に対する防御力は少なくとも 7 か月間 68% 以上持続しました 8 。ウイルス感染に対する長期的な防御をもたらす適応記憶 T 細胞応答を測定することは、SARS-CoV-2 感染に対する感受性を示す最良の指標であり、したがって、特異的な T 細胞の反応性が異なるため、新型コロナウイルス感染症の検査で陽性反応を示すリスクをより適切に示すことができます。細胞は感染を防ぐことができます。血清変換なし10、11。しかし、T細胞応答の測定は、特にワクチンの有効性を評価し、免疫を監視するための大規模な観察研究を実施する場合、静脈血サンプルの取得と輸送における方法論的な困難と物流上の問題により、あまり注目されていません。しかし、ワクチン接種を受けた人はSARS-CoV-2変異体に対して強いT細胞活性を示し、抗体反応性の損失を相殺して新型コロナウイルス感染症の重症度を制限する可能性がある2,13。
ここでは、以前の免疫影響因子に関係なく、SARS-CoV-2 T細胞反応の単一測定によって、採血後6か月以内のSARS-CoV-2感染の絶対リスクを予測できるかどうかを理解しようとしました。T 細胞検査を高スループットにし、大規模な研究に適用できるようにするために、毛細管指刺し血液サンプルを使用して実行できるように検査を小型化することも試みました。
全静脈血に基づく SARS-CoV-2 T 細胞と IgG 抗体の組み合わせ検出を使用して、健康なドナーの細胞性および体液性免疫応答を測定しました (参加者の特徴については、2022 年 3 月 14 を参照してください。ワクチン接種されたドナーでは、SARS-CoV-2-特異的なT細胞応答は、SARS-CoV-2ペプチドによる全血刺激後の血漿インターフェロン-γ（IFN-γ）レベル（以前と同様、参考文献14、15、16、17、18）および関連するIgG応​​答を測定することによって決定された。ヌクレオカプシド（N）を含む反応は、以前の感染を報告した人で増加しましたが、両方の反応は以前に感染したワクチン接種を受けていないドナーでより高く、体内で最大でした（図1a、b）。過去に感染したワクチン接種を受けたドナーで最も高かった（図1c〜e）。
a SARS-CoV-2 特異的 IFN-γ+ T 細胞反応は、参加者のワクチン接種および以前の SARS-CoV-2 感染状態 (PCR および/または側方流動検査で確認) に基づいて、静脈全血アッセイによって測定されました。 + /Inf +' n = 60 (緑)、'Vac + /Inf-' n = 82 (青)、'Vac-/Inf +' n = 4 (黄)、'Vac-/Inf-' n = 1 (適用されません)。SARS-CoV-2 特異的 IgG 結合反応は、ヌクレオカプシド (「N」) (b; ****P < 0.0001、**P = 0.0016)、スパイク受容体結合ドメイン (「RBD」) (c; **) を標的とします。 P = 0.0022、*P < 0.015)、スパイク サブユニット 1 (「S1」) (d; ***P = 0.0005、*(Vac + /Inf+ 対 Vac + /Inf-) P = 0.022、*(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0.012) およびピークサブユニット 2 (「S2」) (e) は、静脈全血検査によって測定され、参加者のワクチン接種と以前の SARS -CoV-2 (PCR および/によって確認) に基づいて測定されました。またはラテラルフローテスト）感染状態。「Vac + /Inf +」 n = 60 (緑)、「Vac + /Inf-」 n = 71 ～ 82 (青)、「Vac-/Inf +」 n = 4 (黄)。比較はクラスカル・ウォリス検定を使用して行われ、ダン検定を使用して多重比較用に調整されました。データは、最小値と最大値にひげが付いたグラフ (中央線が中央値、上限が 75 パーセンタイル、下限が 25 パーセンタイル) として表示されます。各ドットはドナーを表します。生データは生データ ファイルの形式で提供されます。
採血後、参加者は新型コロナウイルス感染症（COVID-19）のPCR検査や側方流動検査の陽性結果を自己申告するよう求められた。参加者が2021年9月1日から2021年12月29日までの間に陽性反応を示した場合、2021年12月29日以降にウェールズ公衆衛生局に対してデルタ（B.1.617.2）変異型コロナウイルスとオミクロン（B.1.1.529）に感染していると推定される。この懸念の選択肢が支配的になります。評価可能なドナー 148 人のうち、献血後 6 か月以内の感染率は 26.3% (148 人中 39 人) であり、そのうち 38 人が 2 回目または 3 回目の新型コロナウイルス感染症ワクチンの接種を受けました (感染のブレイクスルーはファイザー/ビオンテックの後に発生しました) BNT162b2) mRNA ワクチンまたはアストラゼネカ ワクチン (ChAdOx1 nCoV-19))。ワクチン接種を受けていないドナーも感染した。SARS-CoV-2特異的IFN-γ陽性T細胞反応の大きさは、主に以下の理由により、新型コロナウイルス感染症の診断検査で陽性反応を報告した人の方が非感染ドナーよりも有意に低かった（P < 0.0001;図2a）。一部の参加者におけるワクチン接種によるT細胞応答の最適な誘導（P = 0.050;補足図1）。IFN-γ+ T細胞反応の大きさと、COVID-19検査結果が陽性となるまでの時間との間には相関関係はありませんでした（補足図2）。対照的に、RBD、S1、S2結合IgG応答（図2b〜d）もRBD、S1中和抗体応答も、野生型またはデルタSARS-CoV-2（B.1.617）に特異的ではありませんでした。）（補足図3）は、感染のリスクがある人々を区別できます。ただし、SARS-CoV-2に対する低いN結合型IgG応答は、COVID-19感染のリスクと相関していました（P = 0.0084;図2e）。検査結果が陽性だった人の可能性は 85% 低かった (P = 0.00035; OR 0.15, 95)。% CI: 0.047 ～ 0.39 (補足図 4)。
健康なドナー（n = 148）からの静脈血サンプルで、SARS-CoV-2 特異的 IFN-γ+ T 細胞反応（a; ****P < 0.0001）および特異的 SARS-CoV へのスパイク受容体の結合を評価しました。 -2刺激。ドメイン (「RBD」) (b)、スパイク 1 サブユニット (「S1」) (c)、スパイク 2 サブユニット (「S2」) (d)、およびヌクレオカプシド (「N」) (e; **P = 0.0084) 。COVID-19 検査で陽性反応を示した参加者 (PCR および/または側方流動) を特定。すべての感染は採血後 6 か月以内に発生しました。比較は両側マンホイットニー検定を使用して行われました。データは、最小値と最大値にひげが付いたグラフ (中央線が中央値、上限が 75 パーセンタイル、下限が 25 パーセンタイル) として表示されます。各ドットはドナーを表します。nsは重要ではありません。ヒートマップ f は、指定されたデータセットの変数間のスピアマンの順位相関を示します。統計的に有意ではなかった比較はマトリックスから除外され、空白のセルでマークされました。生データは生データ ファイルの形式で提供されます。
事前に設定された診断陽性カットオフ値 14 は、再感染のリスクを評価するには恣意的すぎると考えられたため、絶対的なリスクパラメータを確立するために四分位範囲が設定されました。結果に重大な影響を与える変数のみを含む統計モデルは、SARS-CoV-2 特異的 IFN-γ+ T 細胞応答の大きさが、個人が感染する可能性を決定するための最も重要な免疫バイオマーカーであることを示しました。新型コロナウイルスの検査済み。-19 陽性 (図 2f および補足図 4)。第 3 四分位 (194 ～ 489 pg/ml IFN-γ) および第 4 四分位 (>489 pg/ml IFN-γ) で SARS-CoV-2 特異的 IFN-γ+ T 細胞応答を示す患者は 65% (P = 0.055; OR 0.35、95% CI: 0.11-1.00) と 90% (P = 0.0050; OR 0.098、95% CI: 0.014-0.42) の方が参加者数が多かった。可能性は低いです (補足図 4)。全体として、静脈血からの IFN-γ が 79 pg/mL 以下の SARS-CoV-2 特異的 T 細胞反応を示す参加者は、反応が 489 pg/mL を超える場合と比較して、6 か月時点での突出感染のリスクが 43.2% でした。ml の IFN-γ の感染リスクは 5.4% でした (表 2)。
静脈全血検査は、瀉血専門医によるサンプル採取が必要なため、範囲が限られています。SARS-CoV-2 の T 細胞および IgG 検査の利用可能性を高めるために、参加者が自宅で指刺し血液サンプルを採取できる代替の毛細管採血法が開発されました。私たちの知る限り、毛細血管血液サンプルにおける抗原特異的 T 細胞機能の測定に関するこれまでの報告はありません。同等の毛細血管サンプルと静脈血サンプルを使用して得られたリンパ球数の間には、強い相関関係があることが以前に示されています。さらに、SARS-CoV-2 特異的 T 細胞応答を測定する全血ベースのアッセイでは、静脈血 320 μL のみを使用することが報告されており 20、毛細血管血液サンプル中の前駆体 T 細胞の頻度に関する懸念が排除されています。
私たちは、毛細管全血に基づく SARS-CoV-2 T 細胞と IgG 抗体のこのハイスループットの標準化された共同アッセイを使用して、さまざまな併存疾患や以前のワクチン接種/感染状態を持つ参加者の細胞性および体液性免疫応答を測定しました (表 1)。2022 年 1 月 24 日から 3 月 14 日までに英国全土から募集されました14。指サンプルの大部分 (90.9%) は正しく採取され、採取後 24 時間以内に検査室に送られました。場合によっては、採血後 48 時間以内にサンプルを受け取りましたが、これらのサンプルは品質管理チェックに合格せず、全体的な T 細胞または抗体の測定に影響を与えませんでした (補足図 5)。一部の個人では、それぞれの毛細血管サンプルと静脈血サンプルで測定された SARS-CoV-2 特異的 IFN-γ+ T 細胞応答の大きさに差がありましたが、全体としては有意差はありませんでした（P = 0.88;補足図 6）。 ）。）。
SARS-CoV-2 特異的 IFN-γ+ T 細胞反応は、以前の感染も報告したワクチン接種を受けた個人で有意に増加しましたが (P = 0.0001)、以前に感染したワクチン接種を受けていないドナー個人よりも有意に高くはありませんでした (P = 0.19、図3a)。）。スパイク糖タンパク質（RBD、S1、S2）に対する IgG 応答は、以前の感染状態に関係なく、ワクチン接種済みのドナーよりもワクチン接種を受けていないドナーの方が有意に高かった（図 3b ～ d）。興味深いことに、平均N結合IgG応答は、ワクチン接種を受けた参加者と比較して、以前に感染したワクチン接種を受けていない参加者で最も高かったが、これは有意には達しなかった(図3e)。自己申告したワクチン接種および未感染のドナーのうち、参加者 37 人中 15 人 (40.5%) が N 結合型 IgG 陽性であり、以前に設定された閾値である 2.0 BAU/mL を上回っていました14。これら 15 人の参加者のうち 12 人は、以前に確立された閾値である 22.7 pg/mL IFN-γ14 を超える IFN-γ+ T 細胞反応が陽性でした。したがって、これらの参加者は以前にSARS-CoV-2に感染していたが、個人的な選択、PCRおよび/または側方流動装置の欠如により、新型コロナウイルス感染症の検査を受けていないか、無症状であった可能性が高い。IFN-γ+ に対する T 細胞応答とワクチン接種を受けていないドナーの N 結合型 IgG レベルの間には有意な相関関係がありましたが (P = 0.0044; 補足図、N 結合型 IgG 応答は N 結合型 IgG 応答よりも速く減少しましたが、IFN-γ + T細胞応答は、ワクチン接種状態に関係なく維持されましたが、攻撃後50週間のドナー数は少なかった（補足図8）。ワクチン接種の種類は、一般に、SARS-CoV-2、Tに特異的に観察されたIgG応答にほとんど違いはありませんでした。ただし、BNT162b2 を 2 回投与した後に mRNA1273 再ワクチン接種を受けた参加者は、ChAdOx1 と BNT162b2 を 2 回投与した参加者よりも、有意に高いレベルの IFN-γ + T 細胞が SARS-CoV-2 に対して感受性が高かったことが示されました（補足）図9）さらに、報告された併存疾患では、健康なドナーと比較して、観察されたT細胞応答に全体的な差異はほとんどありませんでした（補足図10）。
a SARS-CoV-2特異的IFN-γ+ T細胞反応は全血毛細管アッセイによって測定され、参加者のワクチン接種および以前のSARS-CoV-2感染状態（PCRおよび/または側方流動検査によって確認）に基づいていた。「Vac + /Inf +」 n = 42 (緑)、「Vac + /Inf-」 n = 158 (青)、「Vac-/Inf +」 n = 33 (黄)、「Vac- /Inf-」 n = 37 (グレー)。****P < 0.0001、***P = 0.0001、*(Vac+/Inf- 対 Vac-/Inf-) P = 0.045、*(Vac-/Inf+ 対 Vac- /Inf-) P = 0.014 。スパイク受容体結合ドメイン (「RBD」) への SARS-CoV-2 特異的 IgG 結合反応 (b; ****P < 0.0001、ns: 有意ではない)、スパイク サブユニット 1 (「S1」) (c; ** **P < 0.0001、ns: 有意ではない)、スパイクサブユニット 2 (「S2」) (d; ****P < 0.0001、***P = 0.0005、*P = 0.016)、およびヌクレオカプシド (「N」) (e; ****P < 0.0001、ns は有意ではない) は、静脈全血分析を使用し、参加者のワクチン接種および以前の SARS-CoV-2 (PCR および/または側方流動分析によって確認) に基づいて測定されました。状態。「Vac + /Inf +」 n = 46 (緑)、「Vac + /Inf-」 n = 182 (青)、「Vac-/Inf +」 n = 34 (黄)、「Vac-/Inf-」 n = 37 (グレー)。比較はクラスカル・ウォリス検定を使用して行われ、ダン検定を使用して多重比較用に調整されました。データは、最小値と最大値にひげが付いたグラフ (中央線が中央値、上限が 75 パーセンタイル、下限が 25 パーセンタイル) として表示されます。各ドットはドナーを表します。生データは生データ ファイルの形式で提供されます。
以前と同様に、参加者は、新型コロナウイルス感染症の PCR および/または側方血流の結果が陽性であることを報告するよう求められました。英国保健庁によると、研究期間中に英国で優勢な変異株だったため、参加者は陽性ウイルス変異株の検査時にオミクロンコロナウイルス（B.1.1.529）に感染していたと推定された。評価可能なドナー 299 人のうち、毛細血管提供後 3 か月以内の感染率は 8.0% (299 人中 24 人) であり、そのうち 7 人はワクチン接種を受けていませんでした。全参加者における併存疾患の割合は、新型コロナウイルス検査で陽性となった人（10.7％）のほうが、新型コロナウイルス検査で陰性だった人（24.4％、表1）よりも低かった。病気にはより注意し、糖尿病やがんなどの潜在的な結果から守ります。静脈血コホートで観察されたように、SARS-CoV-2 特異的インターフェロン γ (IFN-γ) 陽性 T 細胞は、COVID-19 の診断検査で陽性を報告した個人の毛細管血液サンプルで測定されました。ワクチン接種および/または以前の感染によるT細胞応答の誘導が比較的不十分であるため、応答の大きさは非感染ドナーよりも大幅に低かった(P = 0.034;図4a)(補足図11)。同様に、RBD、S1、S2結合IgG応答（図4b〜d）もRBD、S1中和抗体応答も、野生型またはデルタSARS-CoV-2（B. 1.617）に特異的ではありませんでした。(補足図12)。感染の重大なリスクにさらされている個人を特定できます。静脈コホートとは対照的に、N関連IgG応答もCOVID-19リスクを区別せず（図4e）、最近報告されているように、Omicron変異体（B.1.1.529）が以前に感染した個体の免疫回避を増加させることを示唆しています21。対照的に、SARS-CoV-2特異的IFN-γ T細胞反応の強さは、やはり、個々のCOVID-19検査で陽性となる確率を決定する上で最も重要な変数でした（図4f）。全体として、SARS-CoV-2 特異的毛細管 T 細胞応答が 23.7 pg/mL 以下の IFN-γ を示す参加者は、応答が 141.6 pg/mL を超える場合と比較して、3 か月後の感染リスクが 14.9% でした。mlのIFN。-γ の感染リスクは 4.4% でした (表 2)。
SARS-CoV-2 (a; *P = 0.034) および SARS-CoV-2 特異的 IgG 標的受容体結合ドメイン (「RBD」) (b)、スパイク サブユニット 1 (' S1') (c)、スパイクサブユニット 2 ('S2') (d)、およびヌクレオカプシド結合反応 ('N') (e)。参加者は新型コロナウイルス感染症検査（PCRおよび/または側方血流検査）で陽性と判定され、すべての感染は採血後3か月以内に発生した。比較は両側マンホイットニー検定を使用して行われました。データは、最小値と最大値にひげが付いたグラフ (中央線が中央値、上限が 75 パーセンタイル、下限が 25 パーセンタイル) として表示されます。各ドットはドナーを表します。nsは重要ではありません。ヒートマップ f は、指定されたデータセットの変数間のスピアマンの順位相関を示します。統計的に有意ではなかった比較はマトリックスから除外され、空白のセルでマークされました。生データは生データ ファイルの形式で提供されます。
新型コロナウイルス感染症のパンデミックが次の段階に移行するにつれ、焦点は予防から個人のリスク管理、そして社会の弱い立場にあるメンバーの特定へと移っていくでしょう。これらの高リスクグループを効果的に特定して治療するには、新型コロナウイルス感染症に対する免疫の相関関係を確立することが重要です。現在、T 細胞免疫が SARS-CoV-2 感染を防御し、COVID-1910 の重症度を制限するという証拠が増えています。ここで提示されたデータは、スパイク、膜、およびヌクレオカプシド構造タンパク質に対する SARS-CoV-2 特異的 IFN-γ+ T 細胞応答の総合的な強度が、抗体結合よりも強力な 新型コロナウイルス感染症 (COVID-19) に対する保護をもたらすことを示しています。19 応答を促進または中和する。個人免疫および/または集団免疫を評価する際には考慮する必要があります。SARS-CoV-2 やインフルエンザ A ウイルス (IAV) などの RNA ウイルスは、抗体によって認識される表面抗原上の露出した B 細胞エピトープを急速に進化させることで、血清学的中和を回避します。T 細胞によってもたらされる防御免疫応答は、免疫応答からすぐに逃れることができないウイルスタンパク質のより保存された領域からのエピトープの標的化を反映している可能性があります。新規の SARS-CoV-2 変異体に対する T 細胞媒介の防御は、IAV22、23 サブタイプに見られる保存された固有タンパク質の T 細胞標的化によって媒介されるヘテロサブタイプ防御と類似しています。
新型コロナウイルス感染症に対する細胞性免疫応答を測定する大きな可能性があるにもかかわらず、正確でハイスループットな標準化された T 細胞アッセイの開発には比較的ほとんど注目されていません。T 細胞応答の測定に関連する従来の複雑さとコストにより、大集団の免疫をスクリーニングする際に T 細胞免疫を正確に判定することができません。最近、いくつかの市販の全血ペプチド刺激アッセイが利用可能になりましたが、現在、誰もが血液を採取するために瀉血専門医を必要とし、入手可能性と規模が制限されています。毛細血管システムは、集団内の SARS-CoV-2 抗体の有病率を判定するために広く使用されています。われわれは毛細管血液アッセイを応用して全血ペプチド刺激アッセイを実施し、SARS-CoV-2 構造タンパク質に対する T 細胞の反応性および SARS-CoV-2 特異的抗体反応を評価しました。実際、同じ毛細管血液サンプル中の SARS-CoV-2 特異的抗体と T 細胞の組み合わせ測定は非常に魅力的です。(i) 参加者ごとに複数回の血液検査の必要性が減り、(ii) 参加者の経験と理解が向上します。(iii) 物流を改善し、重複を削減します。(iv) 必要な実験室の消耗品やサンプルの配送が少なくなるため、環境への影響が軽減されます。全体的な IFN-γ 反応性は、対応する静脈血サンプルと毛細管血サンプル間で同様でしたが、参加者の毛細管血コホート（図 4a）では静脈血コホート（図 2a）と比較して低いことが観察されました。IFN-γ値 この所見にはいくつかの説明があります。すなわち、免疫抑制療法を必要とする併存疾患を持つ多数の参加者が毛細血管採血コホートに集められ（表1）、血管から得られたT細胞の生存率および/または機能特にペプチド刺激前のサンプルの長期保存条件を考慮すると、サンプルが少なくなる可能性があります。
現在広く利用可能な新型コロナウイルス感染症ワクチンは、ワクチン接種後 6 か月以内であれば、ほとんどの接種者に重篤な疾患に対する最良の防御効果をもたらします8。心強いことは、ワクチンによるSARS-CoV-26,7変異体の血清学的中和が不十分であるにもかかわらず、野生型SARS-CoV-2に対するワクチン接種によって誘発されるT細胞反応は、他の25種類の変異株と同様に高い反応性を維持したことである。ここで我々が提示するデータは、ワクチンの免疫原性をより広範に評価することの重要性を示しており、突然の感染やウイルスの持続的な伝播を防ぐには不十分な T 細胞免疫を持つワクチンに焦点を当てています。また、毛細血管コホートに集められたワクチン接種を受けていない多くの個人が、以前のワクチン接種に関係なく、SARS-CoV-2特異的T細胞（およびN結合IgG）の有意な反応を示したことも観察されたが、これはおそらく以前の感染によるものである。適切な個人にワクチンを接種するのではなく、現在の予防接種状況と情報に基づいた選択に基づいて感染リスクを評価する必要があります。
この研究の限界には、免疫の関連性を判断するための採血後に参加者がSARS-CoV-2への感染を自己報告したという保証が含まれる。参加者の中には無症候性感染症を患っている可能性があり、新型コロナウイルス感染症の PCR 検査や側方流動検査を受けることができない場合があります。私たちのデータセットには、採血時の参加者の投薬に関する情報も不足していました。さらに、参加者全員が軽度/中等度の症状しか報告していないか、無症状であることを考えると、新型コロナウイルス感染症による重症化や入院のリスク増加を予測する免疫反応をデータセットから特定することはできませんでした。しかし、最近では、ヌクレオカプシド特異的エピトープに対する CD8+ T 細胞応答の存在が、重篤な COVID-1926 に対する防御と関連していると考えられています。さらに、ここで使用されたアッセイでは、最近、感染患者と接触した血清陰性の医療従事者に優先的に蓄積することが示された、初期に発現した特定のSARS-CoV-2非構造タンパク質に対するT細胞反応は測定されていない。この研究に基づくと、募集時の市中感染の蔓延と集団内での接触感染の可能性の高さを考慮すると、我々の検査で見つかったSARS-CoV-2特異的T細胞の数も除去可能であると考えられる。私たちのコホートにおける不顕性感染。最後に、IL-2 特異的応答は既存の交差反応性を示す可能性があるものの、以前の研究では SARS-CoV-214 特異的 T 細胞応答の同定が不十分であることが示されたため、T 細胞によるインターロイキン 2 産生は測定しませんでした。SARS-CoV-211感染に対する防御に関連する細胞。
総合すると、これらのデータは、SARS-CoV-2特異的T細胞応答を集団規模の免疫測定に組み込む長期縦断研究の基本的な必要性を浮き彫りにしている。これらの取り組みは、T 細胞反応を測定する新しい毛細血管血液検査の開発によって支援される可能性があります。
この研究プロジェクトは、2021年2月から2022年3月まで参加者を募集した。静脈血サンプルを提供した健康なドナーのコホート（n = 148）は、主にカーディフ大学の新型コロナウイルス感染症検査サービスに参加している大学職員と学生、またはカーディフ大学の小学校の職員で構成されていた。カーディフ。すべての参加者はそれ以外は健康であり、免疫抑制剤の服用を報告していませんでした（特徴については表1を参照）。毛細管血液サンプルを提供した参加者のコホートには、英国全土からの自発的提供者全員 (18 歳以上) が含まれていました。2022年1月24日から3月14日までに、342人の参加者が研究に登録され、そのうち299人が血液サンプルを検査室に提出した。多くの参加者はワクチン接種を受けていないか、自己免疫疾患やがんなどの重篤な併存疾患を報告していました（特徴については表1を参照）。この研究は、ニューカッスルおよびノー​​スタインサイド 2 研究倫理委員会 (ID IRAS: 294246) およびカーディフ大学医学部研究倫理委員会 (SREC ref: SMREC 21/01) から倫理的承認を得ました。すべての参加者は、参加前に書面によるインフォームドコンセントを受け取りました。参加者は、この研究への参加に対していかなる報酬も受け取りませんでした。
静脈血サンプルは、6 または 10 ml のリチウムまたはヘパリン ナトリウム バキュテナー (BD) に静脈穿刺することによって取得しました。毛細管血液サンプルはフィンガーランセットで採取され、ヘパリンマイクロコンテナ (BD) に収集されました。少なくとも 400 µl の血液が必要です。この量未満のサンプルは拒否されます。サンプル拒否のその他の理由には、大量の凝固および/または溶血、分析用の粘性血漿の収集失敗などが含まれます（補足図5）。合計 299 個の毛細管血液サンプルが抗体反応の評価に利用でき、そのうち 270 個のサンプルは T 細胞反応の評価にも利用できました。
SARS-CoV-2 特異的 T 細胞応答は、COVID-19 Immuno-T アッセイ (ImmunoServ Ltd) を使用して評価され、前述のように実行されました 14。簡単に説明すると、6 ml または 10 ml のヘパリンナトリウム (BD) 静脈バキュテナー 1 つが各参加者から採取され、採血後 12 時間以内に研究室で処理されました。ほとんどの検体は 24 時間以内に処理されましたが、指刺しサンプリング後 48 時間以内に 400 ～ 600 μl のヘパリン処理微小出血 (BD) 毛細管血が 1 つ採取されました。静脈および/または毛細血管の血液サンプルは、以前に記載されているように、SARS-CoV-2 (野生型変異体) に特異的な個別のペプチドプールで刺激されました 14。このペプチドライブラリには、スパイクタンパク質 (S1 および S2) (S; NCBI タンパク質: QHD43416 1)、ヌクレオカプシドリンタンパク質 (NP; NCBI タンパク質: QHD43423 2)、および膜糖タンパク質 (M) にわたる 11 個の重複アミノ酸を持つ 420 の 15 mer 配列が含まれています。 ；ＮＣＢＩタンパク質：ＱＨＤ４３４１９ １）コード配列（「Ｓ－／ＮＰ－／Ｍ－コンビナトリアルペプチドライブラリー」と呼ばれる）。すべてのペプチドを >70% まで精製し、滅菌水に溶解し、ペプチドあたり 0.5 μg/ml の最終濃度で使用しました。サンプルを 37℃で 20 ～ 24 時間インキュベートしました。次に、チューブを 5000 xg で 3 分間遠心分離し、各血液サンプルの上部から約 150 μl の血漿を収集しました。サイトカイン/抗体検出アッセイを実行する前に、血漿サンプルを -20°C で最大 1 か月間保存します。
IFN-γは、IFN-γ ELISA MAX Deluxe Set (BioL​​egend、カタログ番号 430116) を使用して測定し、製造業者の指示に従って実施した。停止溶液(2N H2SO4)を添加した直後に、BioLegend Mini ELISAプレートリーダーを使用してマイクロプレートを450nmで読み取った。IFN-γは、GraphPad Prismを使用した標準曲線外挿によって定量されました。アッセイの検出下限を下回る値は 7.8 pg/ml として記録され、アッセイの検出上限を上回る値は 1000 pg/ml として記録されました。
抗 SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG 抗体は、Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex パネル (Bio-Rad、カタログ番号 12014634) を使用して測定し、以下に従って標識しました。メーカーの説明書。説明書 。定量限界を超える値を報告したサンプルは、1:1000 希釈で再分析されました。ビーズの平均蛍光強度は、Bio-Plex 200 機器 (Bio-Rad) で測定されました。抗体濃度は VIROTROL SARS-CoV-2 単一対照アッセイ (Bio-Rad) によって計算され、メーカーの校正係数を使用して WHO/NIBSC 20/136 国際参照標準単位 (BAU/mL) に変換されました。
SARS-CoV-2 野生型およびデルタ (B.1.617) SARS-CoV-2 株に対する RBD および S1 サブユニット特異的中和抗体は、Bio-Plex Pro ヒト SARS-CoV-2 バリアント中和抗体キット (Bio-Plex Pro ヒト SARS-CoV-2 バリアント中和抗体キット) を使用して測定されました。 -Rad、部品番号 12016897)、メーカーの指示に従ってください。Bio-Plex 200 (Bio-Rad) で平均蛍光強度を測定し、次の式を使用して阻害 (中和) パーセントを計算します。
SARS-CoV-2 の感染性中和アッセイは、以前に記載されているように実行されました 28。簡単に説明すると、600 PFUの野生型SARS-CoV-2を、血漿の3倍段階希釈液と2連で37℃で1時間インキュベートした。次いで、混合物をVeroE6細胞に48時間添加した。単層を4％パラホルムアルデヒドで固定し、0.5％NP-40で透過処理し、ブロッキング緩衝液（0.1％トゥイーンおよび3％スキムミルクを含むPBS）中で1時間インキュベートした。一次抗体(抗ヌクレオカプシド1C7、Stratech)をブロッキング緩衝液に室温で1時間添加した。洗浄後、二次抗体 (抗マウス IgG-HRP、Pierce) をブロッキング緩衝液に 1 時間添加しました。単層を洗浄し、Sigmafast OPDを使用して展開し、Clariostar Omegaプレートリーダーで読み取った。ウイルスを含まないウェル、ウイルスはないが抗体を含まないウェル、および中間の活性を示す正規化血清を対照として各実験に含めた。
統計分析は GraphPad Prism (バージョン 9.4.1) で実行されました。データセットの正規性は、Shapiro-Wilk 検定を使用して検定されました。すべての比較にはノンパラメトリック基準が使用されました。マン・ホイットニー検定は対応のないサンプルに使用されました。すべての検定は両側検定であり、名目上の有意性閾値は P ≤ 0.05 でした。
データセットの最初の探索的分析は R (バージョン 4.0.3) で行われました。これには、2 つの変数間の相関が正方形のサイズと色で表される、スピアマンの一変量順位相関行列の開発が含まれます。関連間の統計的有意性は、スピアマンのローを使用して計算され、値 ≤0.05 が有意であるとみなされます。統計的に有意ではなかった比較はマトリックスから除外され、空白のセルでマークされました。P 値は、ホルム補正を使用して多重比較用に調整されました。バイナリ ロジスティック回帰モデルを使用して、データセット内の変数が COVID-19 に対する陽性反応に及ぼす影響をシミュレートしました。IFN-γ T 細胞反応および抗 RBD/S1/S2/N IgG 力価スコアを係数に変換し、各個人を各スコアの適切な四分位に割り当てました。その後、統計パッケージ (V4.0.3) の glm 関数を使用して初期の調査モデルを開発しました。この元のモデルから導出されたオッズ比は、OddsPlotty パッケージ (V1.0.2) の「odds_plot」関数を使用してモデルの係数から抽出されました。相互検証モデルを開発するとき、bestglm パッケージ (V0.37.3) の「bestglm」関数を使用して、ユーザーのバイアスを制限し、予測子の最適なサブセットが選択できるようにしました。選択された方法は「徹底的」であり、モデルの適合性を評価するために使用された情報基準は AIC でした。上で説明したのと同じワークフローを使用してオッズ比を取得しました。
研究デザインの詳細については、この記事にリンクされている Nature 研究の要約を参照してください。
手紙や資料のリクエストは、Martin Scarr 博士または Andrew Godkin 教授に宛ててください。この記事では元のデータを提供します。
統計モデルの作成に使用される R コードは、要求なしで公開されています29。再版情報とライセンスについては、www.nature.com/reprints をご覧ください。
マンロー、APS 他。英国におけるChAdOx1 nCov-19またはBNT162b2（COV-BOOST）の2回投与後の3回目の投与（ブースター）としての7つの新型コロナウイルスワクチンの安全性と免疫原性：第2相、盲検、多施設共同、ランダム化対照試験。ランセット 398、2258–2276 (2021)。
スチュワート、ASV et al.英国におけるmRNA、ウイルスベクター、タンパク質アジュバントワクチンを用いた新型コロナウイルス感染症（Com-COV2）に対する異種一次ワクチン接種の免疫原性、安全性、反応原性：第2相、単盲検、ランダム化試験、非劣性試験。ランセット 399、36–49 (2022)。
Lee、ARIB et al.免疫不全患者における新型コロナウイルス感染症ワクチンの有効性:系統的レビューとメタ分析。BMJ 376、e068632 (2022)。
Dejnirattisai、W. et al.免疫後の血清によるSARS-CoV-2ミクロン変異体B.1.1.529の中和の減少。ランセット 399、234–236 (2022)。
Lipsich M、Krammer F、Regev-Yohai G、Lustig Y、Baliser RD SARS-CoV-2 ワクチン接種者における突破口感染：測定、原因、および結果。免疫学の国家司祭。https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021)。
Levin, EG et al.BNT162b2 Covid-19 ワクチンに対する免疫液性反応が 6 か月間弱まった。N.eng.Ｊ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．385、e84 (2021)。
カレーニョ、JM 他SARS-CoV-2 オミクロンに対する回復期血清とワクチン血清の活性。ネイチャー 602、682–688 (2022)。
Chemaitelly、H. et al.SARS-CoV-2 オミクロン BA.1 および BA.2 サブバリアントに対するカタール mRNA ワクチンの防御期間。medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022)。
タイ、MZ 他新型コロナウイルス感染症（COVID-19）デルタワクチンの画期的な感染により、記憶B細胞の頻度が減少します。分子医学EMBO.14、e15227 (2022)。
Kundu, R. et al.交差反応性メモリー T 細胞は、新型コロナウイルス感染症 (COVID-19) との接触者を SARS-CoV-2 感染から守ることに関連しています。ナショナルコミューン。13、80 (2022)。
Geurtsvan Kessel、CH et al.COVID-19 ワクチン接種者における特徴的な SARS CoV-2 ミクロン反応性 T 細胞および B 細胞反応。科学。免疫学。https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022)。
Gao、Yu et al.遺伝性 SARS-CoV-2 特異的 T 細胞は、Omicron 変異体を相互認識します。国立医学。28、472–476 (2022)。
スカー、MJ 他全血からの SARS-CoV-2 特異的 T 細胞の測定により、健康な個人および固形臓器がん患者における無症候性感染とワクチンの免疫原性が明らかになりました。
タン、AT et al.ワクチン接種を受けた個人および自然感染者の全血中の SARS-CoV-2 スパイク T 細胞の迅速な測定。Ｊ．クリニカル．投資する。https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021)。
タランタイア、EU 他多発性硬化症患者における COVID-19 ワクチン反応。インストール。ニューロン。91、89–100 (2022)。
ブラッドリー RE 他ウィスコット・アルドリッチ症候群を伴う持続的な新型コロナウイルス感染症は、治療用ワクチン接種後に消失した：症例報告。Ｊ．クリニカル．免疫学。42、32–35 (2022)。